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Testes histoquímicos em vegetais

Descrição: http://www.lapemm.ufba.br/HP2000/Image55.gif

Apostila de Aula Prática de Farmacognosia UFBA

Teoria da prática

Testes de coloração

A coloração consiste em passar o material em solução de corantes ou reagentes. Assim o material apresentará uma, duas ou mais cores diferentes, ou então apenas algumas estruturas ficarão coradas.

As soluções coradas devem ser guardadas em frascos âmbar para evitar possível decomposição pela luz.

É a camada depositada externamente à membrana plasmática encontrada em células vegetais. Tem uma estrutura microfibrilar e uma matriz.

A parede primária é a camada externa da parede celular depositada durante o crescimento da célula. Na sua composição entram celulose (30%), hemicelulose (30%), pectinas (30%) e proteínas (10%).

A parede secundária é a camada mais externa da parede celular depositada, em alguns tipos de células, sob a parede primária após ter cessado o crescimento celular. Na sua composição entram celulose (50-80%), hemiceluloses (5-30%) e lignina (15-35%).

Há nas células vegetais vários tipos de substâncias de reserva: açúcar, amido, celulose, óleos gordurosos e proteínas. O açúcar encontra-se dissolvido no sulco celular. O amido forma grãos sólidos. A celulose é depositada nas membranas celulares. Os óleos se acham ou em vários vacuolos especiais, sob forma de gotas, ou distribuídos no suco celular, sob forma de finíssima emulsão. Além de substâncias de reserva, há em algumas células inclusões sólidas, formadas por material mineral. Trata-se de cristais de oxalato de cálcio ou de carbonato de cálcio.


Prática

Objetivo: Identificar alguns componentes químicos em tecidos vegetais.

Material de uso comum

Material por grupo

Experimento 1: observação de produtos oleosos.

  1. Fazer cortes à mão livre de materiais frescos (folha de hortelã) e colocá-los em etanol 50%.

  2. Transferir os cortes para vidro de relógio e pingar Sudam III sobre eles.

  3. Cobrir o vidro de relógio para evitar evaporação. Esperar de vinte a trinta minutos.

  4. Lavar os cortes em etanol 80%.

  5. Montá-los entre lâmina e lamínula.

  6. Pingar uma gota de água ou glicerina 50% na borda da lamínula e retirar o etanol em papel de filtro.

  7. Observar ao microscópio.
O corante Sudam cora lipídios, cutina e suberina de amarelo-alaranjado ou vermelho.


Experimento 2: observação de compostos fenólicos.

  1. Fazer cortes a mão livre de materiais frescos (folha de caju) e colocá-los em água.

  2. Transferir os cortes numa lâmina e pingar 1 gota do reagente cloreto férrico sobre eles.

  3. Montá-los entre lâminas e lamínulas e aguardar um ou dois minutos.

  4. Pingar uma gota de água ou glicerina 50% na borda da lamínula e retirar o reagente com papel de filtro.

  5. Observar ao microscópio.
O cloreto férrico produz coloração azulada ou verde escuro com compostos fenólicos.


Experimento 3: identificação da composição química da parede celular - celulose e lignina.

  1. Fazer cortes transversais do caule Wadelia s.p e colocá-los em água destilada.

  2. Logo após transferir os mais finos para água sanitária, a fim de escorá-los, e posteriormente lavá-los com água destilada.

  3. Colocá-los em vidro de relógio com verde iodo por um minuto.

  4. Transferi-los para vidro de relógio com água destilada.

  5. A seguir colocá-los em vidro de relógio com vermelho congo por cinco minutos. Lavá-los posteriormente com água destilada.

  6. Montá-los em gota de água destilada entre lâmina e lamínula, e observar ao microscópio.
A celulose tem afinidade pelo vermelho congo e a lignina tem afinidade pelo verde iodo.


Experimento 4: identificação da composição química do cistólito.

  1. fazer cortes paradérmicos da face abaxial da folha de arruda ou da folha de Sauchesia mobilis.

  2. Descorá-los e montá-los em 1 gota de água entre lâmina e lamínula. Observar ao microscópio.

    a) identificar o cristal.

    b) testá-lo com uma gota de ácido acético e,depois uma gota de ácido clorídrico.

  3. Observar ao microscópio.

Avaliação

  • Que substância foi identificada pelo cloreto férrico? Onde estas substâncias são encontradas nas plantas?
  • Faça o desenho esquemático das estruturas observadas ao microscópio no experimento 3, caracterizando os tipos de células que foram coradas de vermelho e as que foram coradas de verde
  • O que se pode concluir a respeito da composição química do cistólito após testá-lo com ácido acético e com ácido clorídrico? Explique.
  • Quais tipos de substâncias são coradas pelo Sudam III.

Referências bibliográficas

Sugestão de leitura

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